細胞培養(yǎng)是一種常用的發(fā)酵工藝,多采用攪拌式細胞發(fā)酵系統(tǒng),也可采用管式系統(tǒng)。在發(fā)酵過程中,不斷向發(fā)酵罐灌流培養(yǎng)液,同時以相同流量流出。灌流工藝的優(yōu)點是可在發(fā)酵過程中不斷去除細胞碎片和副產(chǎn)物,降低細胞死亡后釋放的各種酶類可能對產(chǎn)物的影響。同時,由于連續(xù)不斷的灌流新鮮培養(yǎng)液而提供一個較恒定的培養(yǎng)環(huán)境,因此可獲得較高的單位體積產(chǎn)率。由于灌流系統(tǒng)多采用細胞截留與回收系統(tǒng),因而可實現(xiàn)細胞的高密度發(fā)酵。
細胞培養(yǎng)時各種添加物的具體作用:
胰島素(Insulin,貨號:CSP001)作用廣泛,包括調(diào)節(jié)脂肪和蛋白質(zhì)的代謝以及促進細胞生長等。胰島素功能的發(fā)揮源于其對細胞的作用,進而引起組織乃至機體的整體反應。一般可將胰島素在細胞水平的作用分為三大類:代謝作用、促生長作用、以及代謝和促生長混合作用。胰島素對細胞的代謝調(diào)節(jié)作用主要是通過其與細胞膜上的胰島素受體(Insulin receptor, IR)相互作用而介導,而胰島素對細胞的促生長作用則是通過其與細胞膜上胰島素樣生長因子受體(IGF Receptor, IG)相互作用而介導的。在無血清細胞培養(yǎng)液中,常添加胰島素來維持細胞生長,調(diào)節(jié)細胞對葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的攝取、利用和貯存,同時抑制糖原、蛋白質(zhì)和脂肪的分解。
丙酮酸鈉(Sodium Pyruvate,貨號:CSP003)是常見的丙酮酸鹽,是一類內(nèi)源性小分子物質(zhì),丙酮酸鈉和丙酮酸均是天然存在于人體內(nèi),并參與全身各組織和器官的代謝。丙酮酸鈉在醫(yī)學上、診斷試劑以及醫(yī)療器械中被廣泛用作緩沖劑、賦形劑和抗氧化劑。在人體中行動中大多數(shù)細胞只利用葡萄糖作為能量的物質(zhì)就夠了,而在細胞培養(yǎng)中丙酮酸鈉是必須的物質(zhì)。丙酮酸鈉在培養(yǎng)基中起到替代碳源的作用,參與細胞營養(yǎng)代謝。Hep G2,Caov-3及細胞培養(yǎng)基中就需要額外添加丙酮酸鈉,以維持細胞良好的生長狀態(tài)。